缓冲液（Buffer）：指由一种共轭的质子给体和质子受体构成的可离子化合物的溶液，它可以在加入少量酸或碱时维持溶液pH稳定的作用。常用缓冲液溶质的pK_a数据如下：

缓冲液的作用主要有两个方面：

（1）缓冲分析物，使其保持在所需的pH值处。由于在实际分析工作中，色谱柱上的样品质量非常少，因此仅需要很少的缓冲液就能为样品提供足够的缓冲。如果样品与流动相的pH值相差大，且进样量太大，建议在进样前先调节样品溶液至接近流动相pH值。

（2）缓冲色谱柱，使其保持恒定的pH值。由于大量的缓冲流动相通过色谱柱，所以固定相不断暴露在缓冲液中。随着现在商品化的硅胶基质色谱柱纯度的提高，硅胶上的酸性硅醇基团的含量也越来越低，因此所需的缓冲液也越来越少。下图是高纯、中等纯和低纯硅胶的柱子在添加0.1%和增加0.01%TFA时分析图谱对比：

缓冲能力（Buffer Capacity）：它取决于两个因素：

（1）缓冲液的浓度。下图就是醋酸盐在5 MM，10 mM，20 mM和40 mM浓度下的缓冲容量，可以看到它往往在它的pK_a，即pH 4.75处呈现最大的缓冲能力，而且随着浓度增加，缓冲能力也增加。

因此为了获得足够的缓冲能力，一般需要适当浓度的缓冲液。推荐的最终溶液中，对于酸性添加剂一般在0.1% v/v左右，或者至少含有5-10 mM的缓冲液。一般来说，对于大多数的应用，10-25 mM的添加剂已经足够，但是最好根据具体情况确定。

（2）溶液的pH和缓冲盐pK_a的差值。不同的缓冲液一般有不同的缓冲范围，一般来说，在其pK_a值上下浮动1个pH单位内使用时，缓冲液是最有效的；在pK_a值上下浮动2个单位内时，也可以提供足够的缓冲。因此从上表中就可以得到缓冲液对应的缓冲范围。

有机溶剂存在下的pK_a和pH的变化

文献中缓冲盐的pH和pK_a以及分析物的pK_a数据很多是在水中测定，但是pH和pK_a都会随着有机溶剂的加入而发生改变。一般来说随着有机溶剂的加入，酸的pK_a变大，而碱的pK_a变小。虽然有这些变化，缓冲液的缓冲能力并不会因为有机溶剂的加入而发生变化。因此在配置缓冲液的时候，强烈建议在加入有机溶剂之前调节pH值至目标值，当加入有溶剂后，溶液pH会发生变化，但是此时无需再调节。另外，为防止混合过程中缓冲盐发生析出，务必将有机相加入水相，而不是将水相加入有机相。