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液相色谱柱怎么正确进行维护

来源:本站      2023-11-01
导读:色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行


色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。

 1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。 

2、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然,流动相使用前必须经脱气和过滤处理。

3、一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 

4、选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解,压力升高是需要更换预柱的信号。 

5、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处 理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。 

6、经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。

7、避免使用高粘度的溶剂作为流动相;如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净。

8、进样样品要提纯; 

9、严格控制进样量,不要超载。 

10、每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱,最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用,应每隔4~5天开机冲洗15分钟。 

11、大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围。 

12、按说明书保存色谱柱,绝对禁止讲缓冲液留在柱内过夜,注意反相柱不能用纯水长时间冲。

13、不建议拆开柱子,自己更换填料。

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本文最后更新于2023-11-01 16:48:39,如果你的问题还没有解决,可以加入交流群和群友们一起讨论。