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液相色谱的方法开发缓冲盐怎么选?

来源:本站      2023-11-24
导读:适用范围本指导原则仅适用于液相色谱(包括离子色谱)方法开发过程。何时应用缓冲盐?样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向,其他特定少数情况另行叙述。存在较强离子化倾向的组分,其中一部分是分子状态,与反相色谱固定相结合的更好;另一部分是离子状态,更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态,即分子状态

适用范围


本指导原则仅适用于液相色谱(包括离子色谱)方法开发过程。





何时应用缓冲盐?


样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向,其他特定少数情况另行叙述。

存在较强离子化倾向的组分,其中一部分是分子状态,与反相色谱固定相结合的更好;另一部分是离子状态,更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态,即分子状态和离子状态的比例,很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相,应选用缓冲盐/有机相系统。





缓冲能力与pH选择


流动相如用到缓冲盐溶液,其应当有一定的缓冲能力,如果减少进样量,峰形改善,则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大,缓冲能力越强;缓冲盐溶液的pH值越接近其pka,缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内,为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离,缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。





截止波长


每种缓冲盐都有其对应的截止波长,方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长,基线噪音越大,响应值误差越大,组分响应值和灵敏度变小。





常用缓冲盐pka与截止波长列表


缓冲盐

pka

缓冲范围

截止波长

磷酸盐

2.1

<3.1

<200nm(0.1%)

7.2

6.2-8.2

12.3

11.3-13.3

甲酸盐

3.8

2.8-3.8

210nm(10mM)

乙酸盐

4.8

3.8-5.8

210nm(10mM)

碳酸盐

6.4

5.4-7.4

<200(10mM)

三乙胺

11.0

10.0-12.0

<200(10mM)

三氟乙酸

≥2

1.5-2.5

210nm(0.1%)













缓冲盐应用一般思路


1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度,使其满足应有的缓冲能力。


2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值,应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例,确定有机相比例允许最高值,如缓冲盐:有机相为10:90、20:80、30:70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相,以防缓冲盐析出损坏仪器。


3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐,如检测波长在末端吸收,则一般应选用磷酸盐。


4、 常用缓冲盐溶液有:0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液,0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)等


 5、碱性化合物优选钾盐,抑制拖尾效果更好。



在做药物分析的时候出现色谱柱过载的现象我们这么处理了


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本文最后更新于2023-11-24 10:24:56,如果你的问题还没有解决,可以加入交流群和群友们一起讨论。