磺酰氯主要分为脂肪族磺酰氯和芳香族磺酰氯。芳香族磺酰氯的来源有以下几类：
由硫酚，各种硫醚在酸性溶剂中导入氯气制得；
芳香磺酸类化合物在氯化试剂作用下形成；
磺化反应。脂肪族磺酰氯的来源主要是硫醇或相关衍生物氯代或氧化[1]。
在合成工艺中不可避免产生磺酸类的杂质。当前文献中磺酰氯类化合物磺酸检测方法有：
正相高效液相色谱法[2]，但磺酸类杂质在纯有机相中不易溶解，该方法存在较大局限性；
常规反相高效液相色谱法[3]，该方法磺酰氯类化合物易遇水反应生成磺酸类化合物。易造成检测结果偏高。
常规磺酸类杂质在磺酰氯中检测方法，有以下局限：
磺酸类化合物极性大，在液相色谱中保留能力较弱，易受空白溶剂干扰；
磺酸类化合物峰形易受稀释剂影响，容易产生溶剂效应；
磺酰氯类化合物稳定性较差，易遇水反应生成磺酸类化合物，常规高效液相色谱法流动相中大多含有水，会造成检测结果不准确。
针对上述问题，本文以3-甲基-8-喹啉磺酰氯为例，开发出了一种采用氨水衍生的方法，用氨水衍生3-甲基-8-喹啉磺酰氯，形成比较稳定的酰胺，酰胺在水中不易降解成3-甲基-8-喹啉磺酸，并且3-甲基-8-喹啉磺酸与氨水在常规条件下不易生成酰胺（如下图所示），从而准确测定其中含有的磺酸，通过方法学验证，证明该方法可准确有效地检测3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的杂质3-甲基-8-喹啉磺酸。
从上图中可以看出，磺酸与磺酰氯衍生物磺酰胺分离度良好，且磺酸类杂质不与氨水反应生成酰胺，该方法可准确有效地检测磺酰氯化合物中磺酸类杂质。
高效液相色谱仪（waters、安捷伦）、电子天平（梅特勒XS105、奥豪斯ARRW60）
试药：3-甲基-8-喹啉磺酰氯（北京孚众科技有限公司）、3-甲基-8-喹啉磺酸（北京康派森医药科技有限公司）。
试剂：磷酸二氢钾（分析纯，来源北京福晨科技有限公司）、庚烷磺酸钠（分析纯，来源麦克林生化试剂有限公司）、乙腈（色谱纯、来源Fisher）、超纯水（自制）。
色谱条件
1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
2）流动相A：10mmol/L磷酸二氢钾溶液和2.5mmol/L庚烷磺酸钠溶液（取磷酸二氢钾1.36g，1-庚烷磺酸钠0.51g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至4.5）
3）流动相B：乙腈
4）检测波长：230nm
5）流速：1.0ml/min
6）柱温：30℃
7）进样量：20μl
8）洗脱梯度：
溶液配制
1）对照品溶液：取3-甲基-8-喹啉磺酸适量，精密称定，加40%乙腈溶解并稀释制成每1ml含25μg的溶液。
2）供试品溶液：取3-甲基-8-喹啉磺酰氯约10mg，精密称定，置西林瓶中，加乙腈1ml和浓氨水0.05ml，振摇至完全反应，析出结晶，减压干燥至干后，加入乙腈8ml，水4ml溶解，转移至20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
测定法
精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
计算公式：
注：
W对：对照品溶液称样量，mg；
W供试品：供试品称样量，mg；
A对：对照品溶液色谱图中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面积；
A杂质：供试品溶液色谱图中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面积；
V对：对照品溶液的稀释倍数；
V供试品：供试品溶液的稀释倍数。
专属性
对照品溶液中3-甲基-8-喹啉磺酸各色谱参数符合要求，空白溶剂不干扰3-甲基-8-喹啉磺酸检测，专属性良好。
灵敏度试验
取3-甲基-8-喹啉磺酸适量，精密称定，加40%乙腈溶解后，用40%乙腈逐级稀释，配制成定量限及检测限溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。当峰高约为基线噪音的3倍或2倍，即为检测限；当峰高约为基线噪音的10倍时，即为定量限，结果如下表。
灵敏度试验结果
结论：3-甲基-8-喹啉磺酸定量限小于报告限度（0.05%）的50%，检测限小于定量限的0.5倍，方法灵敏度符合要求。
进样精密度试验
取定量限溶液连续进样6针，照拟定方法检测，考察进样精密度，记录色谱图，结果如下表。
进样精密度试验
结论：定量限溶液连续进样6针，峰面积RSD＜5.0%，保留时间RSD＜2.0%，进样精密度符合要求。
线性试验
取3-甲基-8-喹啉磺酸适量，精密称定，加40%乙腈溶解后，分别定量稀释配制成10%、5%、2%、1%、0.1%和0.001%的溶液，照拟定方法检测，记录色谱图，结果如下表。
线性试验结果
结论：3-甲基-8-喹啉磺酸在0.01~51.35μg/ml浓度范围内，R2＞0.999，浓度与峰面积之间线性关系良好。
准确度试验
用3-甲基-8-喹啉磺酸对照品配制0.5%、2%、5%、10%加样回收率溶液，来验证方法的准确性，测得3-甲基-8-喹啉磺酸的回收率在93.00%~105.80%范围内，平均回收率为99.4%，方法准确度较高。
耐用性试验
本方法在流速0.8~1.2ml/min、柱温25~35℃、流动相A pH4.3~4.7、缓冲盐浓度在8~12mmol/L范围内，使用不同厂牌色谱柱和不同仪器，对照品溶液色谱峰各色谱参数均符合要求；供试品中3-甲基-8-喹啉磺酸检出量无明显差异；空白溶剂均不干扰检测，耐用性良好。
该衍生方法反应速度快，条件温和，便于实现。
通过全面的方法学验证，证明该方法具有专属性强、灵敏度高、准确度高的特点，可准确有效地检测3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的杂质3-甲基-8-喹啉磺酸。
参考文献：
[1] 张国柱.经典化学合成反应标准操作-磺酰氯合成法[DB/OL]
[2] 张亚梅.HPLC法测定药物中间体5-磺酰氯异喹啉含量及有关物质[J].世界家苑2018年第09期
[3] 勾新磊，赵铁禅等.UPLC-MS/MS法测定阿加曲班中4个基因毒性杂质[J].药物分析杂质2019年第11期
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本文最后更新于2021-12-20 10:20:37，如果你的问题还没有解决，可以加入交流群和群友们一起讨论。
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