分析方法在药学质量研究中扮演重要的角色，普析手段目前还是在分析领域占据重要的位置，一般尤以HPLC-UV占比最大，一个好的分析方法能有效检出样品中存在的所有杂质，不遗漏某些杂质的检出，以免误导工艺人员正确的开发。 

      分析方法的建立往往在原料药的质量研究中应用颇多，选择合适的分析方法建立思路，快速过渡，以QBD思想快速筛选，以获得最优的分析方法，对于质量研究尤为重要。以下是我在实际工作应用中对于方法建立等方面的一些心得。

分析方法建立的常规思路
 

仿制药分析方法建立，一般有大量参考文献，可以在文献基础上进行优化，事半功倍！ 

创新药分析方法建立，一般参考文献较少，在理论与经验结合的基础上快速建立方法！在HPLC-UV建立之初，我们通常需要完成以下准备：

 1、原料药与杂质结构分析，获得重要信息
原料药与杂质pKa判断，以选取流动相体系最佳pH值。
 

流动相pH值一般选取pKa±2范围之外，以保障化合物处于分子状态，减少电离，此状态下化合物疏水性较强，色谱柱保留时间较长，能获得良好的峰型。

• 酸性化合物，可以选择非缓冲的流动相进行pH调节，用单一的酸溶液（一般常用磷酸）进行色谱分离，酸的浓度应足以使pH值比需要值低的多。

• 碱性化合物，选择是比较有限的，TEA/氨水可以用于调节到高的pH值，但是要求色谱柱能够耐碱比较好。

2、流动相缓冲盐选取

缓冲体系选择的要求：能适当控制离子化、与检测器兼容性、缓冲盐溶液与有机相的互溶性、流动相的pH是否在色谱柱的安全范围内。

常用的缓冲体系的盐一般为磷酸盐与醋酸盐体系，其pKa见下表：
 

3、洗脱剂的选取
反相体系下，常用的洗脱剂为甲醇、乙腈与四氢呋喃。三种溶剂对比如下：
 

3、洗脱剂的选取

a. 影响分离度的总因素

选择性：α；柱效：N；保留因子：N

选择性是影响分离度的最关键因素 ：

优先采用流动相体系，降低溶剂强度（如增加水相比例，调整pH等）。 

助溶剂选择，最好控制在5%以内，避免强溶剂效应。

强保留型色谱柱（AQ色谱柱…..），离子交换色谱柱，离子对试剂， HILIC模式。 

离子对试剂 

• 酸性化合物：四丁基氢氧化铵、四丁基氯化铵、四丁基溴化铵、四丁基硫酸氢铵等。

• 碱性化合物：烷基磺酸盐类，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠等。三氟乙酸、五氟丙酸等全氟取代的直连有机酸等。

分析方法可靠性评估

常规做法：