1. 酰胺类亚硝酸盐的致突变机制

输入结构后，计算亚硝胺类杂质分类（1，2，3，4，5），根据分类给出对应的控制限度。

条件1：

胺源，乙酸，亚硝酸钠水溶液（1.5当量），总的反应物质浓度约为0.1mol/L（如果不到这个浓度，可加水到这个浓度）；

20~25℃条件下尽量采用最小的密闭的容易进行反应以避免NOx的挥发，不加添加任何溶剂，反应液可以是浆状的，需注意保证所有的反应物反应时都是搅拌均匀的。

条件2：

胺源，稀盐酸调节pH，亚硝酸钠水溶液（1.5当量），总的反应物质浓度约为0.1mol/L（如果不到这个浓度，可加水到这个浓度）；

20~25℃条件下尽量采用最小的密闭的容易进行反应以避免NOx的挥发，随时监控反应的pH，并进行调节如有必要的话。

不加添加任何溶剂，反应液可以是浆状的，需注意保证所有的反应物反应时都是搅拌均匀的。

条件3：

胺源，能溶解胺的有机溶剂，亚硝酸叔丁酯，总的反应物质浓度约为0.1mol/L；20~25℃条件下尽量采用最小的密闭的容易进行反应以避免NOx的挥发，整个反应也可以用核磁管加入氘代溶剂，用核磁进行检测。

需要注意的是：这个无水方法制得的亚硝胺杂质在水相下可能不稳定，这种不稳定性也可以作为该亚硝胺杂质不容易生成的证据。

按标准的有关物质方法检测，所有超过0.5%的杂质需进行质谱确认。如何质谱确认可能存在亚硝胺杂质，建议将杂质制备分离，进行结构确证，以排查假阳性的风险（如C-亚硝化，O-亚硝化，肟等）如果检测发现了显著的杂质，需对该杂质进行结构确认，以识别致突变。（可能也是基因毒性杂质）

总结：如果通过上述3个条件确认，目标的亚硝胺杂质不会形成，可表明该亚硝胺杂质无形成的风险。

1.几个不错的网站的推荐

（1）FDA网站

Recommended Acceptable intake Limits for Nitrosamine Drug substance-Related impurities

(FDA对于与原料结构相关的亚硝胺类基因毒性杂质的摄入限度）；网站收载了270个原料相关的亚硝胺杂质，同时对新增的也会不断跟新限度。

https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/cder-nitrosamine-impurity-acceptable-intake-limits

（2）USP的Naiffer收集了各国亚硝胺杂质的集合，包含EMA，FDA，HCAN，TGA）

可以查询亚硝胺类基因毒性杂质限度：包含原料相关的基因毒性杂质和常规小分子亚硝胺类基因毒性杂质。

https://public.tableau.com/app/profile/naiffer.romero/viz/NitrosaminesRegulatoryAILimits/Dashboard1