参考头孢地尼胶囊的说明书，每日最大用量为0.3g，根据FDA发布的《人用药中亚硝胺杂质控制》行业指南，NDMA和NDEA每日可接受摄入量分别为：96.0ng/天和26.5ng/天，计算N-亚硝基二甲胺（NDMA）限度为：96ng/day÷0.3g/day=320ppb，N-亚硝基二乙胺（NDEA）限度为：26.5ng/day÷0.3g/day=88ppb。根据上述限度要求，并参考《中国药典》2020年版四部通则0431质谱法和USP736，对头孢地尼中NDMA和NDEA的检测方法进行验证，此次验证的内容包括：系统适用性、专属性、检测限、定量限、线性及范围、准确度、精密度（重复性和中间精密度）、溶液稳定性和耐用性。
二、验证方法汇总
表1：方法验证结果汇总表
验证项目 | 可接受标准 | 验证结果 |
系统 适用性 | 连续分析5次对照品溶液1，各杂质峰面积的RSD值应不得过15.0%，保留时间的RSD值应不得过1.0%；7针对照品溶液各杂质f值的RSD值应不得过15.0%。 | 连续分析5次对照品溶液1，NDMA和NDEA峰面积的RSD值为4.5%和4.0%（＜15.0%），保留时间的RSD值均为0.1%（＜1.0%），7针对照品溶液NDMA和NDEA f值的RSD值为4.8%和4.1%（＜15.0%）。符合可接受标准，系统适用性符合要求。 |
专属性 | 空白溶液对各杂质的测定无干扰；对照品溶液色谱图中，各杂质峰与相邻峰之间的分离度应符合要求；供试品加标溶液色谱图中，各杂质峰与相邻峰之间的分离度应符合要求，各杂质峰的保留时间应与对照品溶液色谱图中相应峰的保留时间一致。 | 空白溶液对各杂质的测定无干扰；对照品溶液色谱图中，NDMA峰与NDEA峰均无相邻峰，分离度均符合要求；供试品加标溶液色谱图中，NDMA峰与NDEA峰均无相邻峰，分离度均符合要求，NDMA和NDEA峰与对照品溶液色谱图中相应峰的保留时间一致。表明本方法专属性良好。 |
检测限 | 检测限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比应不得小于3。 | 检测限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比为13.1～54.5（＞3），NDMA和NDEA的检测限浓度为0.654ng/ml、0.181ng/ml，即32.7ppb、9.1ppb。 |
定量限 | 定量限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比应不得小于10。 | 6份定量限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比为39.6～174.9（＞10），NDMA和NDEA定量限浓度为1.962ng/ml、0.544ng/ml，即98.1ppb、27.2ppb。 |
6份定量限溶液色谱图中，各杂质峰面积的RSD值应不得过20.0%。 | 6份定量限溶液中，NDMA和NDEA峰面积RSD值为2.0%和3.6%（＜20.0%）。 | |
线性及 范围 | 各杂质线性回归方程的相关系数r≥0.990，Y轴截距不得大于100%浓度响应因子的0.25倍。 | NDMA线性回归方程为y = 219.6 x + 75.1，相关系数r为0.9979（＞0.990），Y轴截距与100%浓度响应因子的比值为0.06（＜0.25）。在NDMA浓度为1.962～13.077ng/ml（即98.1ppb～653.9ppb）范围内，NDMA浓度和峰面积线性关系良好；NDEA线性回归方程为y = 355.8 x + 8.2，相关系数r为0.9952（＞0.990），Y轴截距与100%浓度响应因子的比值为0.02（＜0.25）。在NDEA浓度为0.544～3.624ng/ml（即27.2ppb～181.2ppb）范围内，NDEA浓度和峰面积线性关系良好。 |
精密度 | 重复性：6份重复性溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过15.0%。 | 6份重复性溶液中，NDMA的回收率为101.0%～111.3%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为3.5%（＜15.0%）；NDEA的回收率为103.7%～112.5%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为2.7%（＜15.0%）。均符合可接受标准，表明本方法重复性良好。 |
中间精密度：6份中间精密度溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过15.0%。与重复性6次结果，共12次供试品加标溶液中各杂质回收率的RSD值应不得过20.0%。 | 6份中间精密度溶液中，NDMA的回收率为95.5%～104.1%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为3.5%（＜15.0%）；NDEA的回收率为93.2%～106.1%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为4.5%（＜15.0%）。 两名试验人员所得12份供试品加标溶液中NDMA和NDEA回收率的RSD值为4.4%和4.9%（＜20.0%）。表明本方法精密度良好。 | |
准确度 | 9份准确度溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过20.0%。 | 9份准确度溶液中，NDMA的回收率为81.5%～105.3%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为10.9%（＜20.0%）；NDEA的回收率为84.3%～116.8%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为11.4%（＜20.0%）。均符合可接受标准。表明本方法准确度良好。 |
溶液稳定性 | 对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液，各时间点检测结果与0小时比较各杂质峰面积的比值应为70%～125%。 | 对照品溶液在室温放置102.1小时内，各时间点下NDMA峰面积的比值为93.1%～106.8%，NDEA峰面积的比值为99.5%～115.2%（均在70%～125%之间）； 供试品溶液在室温放置99.5小时内，各时间点下NDMA、NDEA峰面积均为0； 供试品加标溶液在室温放置99.2小时内，各时间点下NDMA峰面积的比值为92.2%～105.7%，NDEA峰面积的比值为100.1%～106.2%（均在70%～125%之间）。 表明对照品溶液在室温放置102.1小时内稳定；供试品溶液在室温放置99.5小时内稳定，不会降解产生NDMA和NDEA；供试品加标溶液在室温放99.2小时内稳定。 |
耐用性 | 在各种不同的耐用性实验条件下，系统适用性应符合要求；各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过20.0%。 | 在各种不同的耐用性实验条件下，系统适用性均符合要求；NDMA的回收率为90.9%～105.1%（在70%～125%之间），各条件下回收率的RSD值为4.9%（＜20.0%）；NDEA的回收率为94.2%～107.5%（在70%～125%之间），各条件下回收率的RSD值为4.6%（＜20.0%）。均符合可接受标准，表明本方法的耐用性良好。 |
表2：头孢地尼中NDMA和NDEA的含量测定结果汇总表
杂质代号 | 可接受标准（ppb） | 检测限（ppb） | 测定结果（ppb） | |||||
B2212107 | B2212105 | B2302103 | AP006-2206-001 | AP006-2211-064 | AP006-2303-016 | |||
NDMA | ≤320 | 32.7 | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. |
NDEA | ≤88 | 9.1 | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. | N.D. |
注：N.D.为未检出，下同。
三、对照品信息
表3：对照品信息
名称 | CAS | 批号 | 纯度（%） | 厂家/经销商 |
NDMA | 62-75-9 | CHI-001 | 99.93 | 化学分析网 |
NDEA | 55-18-5 | CHI-002 | 99.86 | 化学分析网 |
四、样品信息
表4：样品信息
样品名称 | 批号 | 厂家 | 用途 |
头孢地尼 | 方法学验证和检测用 | ||
检测用 | |||
检测用 | |||
头孢地尼 | 检测用 | ||
检测用 | |||
检测用 |
五、试剂和仪器信息
表5：试剂信息
名称 | 级别 | 批号 | 厂家/经销商 | 有效期至 |
二氯甲烷 | 色谱纯 | JA111654 | ||
磷酸氢二钾 | 分析纯 | 1912061 | ||
水 | 超纯水 | N.A |
仪器
表6：仪器信息
仪器名称 | 型号 | 仪器编号 | 厂家 | 校验有效期至 |
分析天平 | ES1055A | |||
GC-MS/MS | TSQ9000 |
六、方法学验证
待验证的方法
6.1.1色谱条件
表7：色谱条件
色谱柱 | VF-624MS（30m×0.25mm，1.40μm） | 柱流速 | 1.200ml/min | |
进样口 | ||||
温度 | 230℃ | 分流比 | 5:1 | |
载气 | 氦气 | 进样量 | 2μl | |
升温程序 | ||||
升温速率（℃/min） | 温度（℃） | 保持时间（min） | ||
N.A | 50 | 2 | ||
20 | 230 | 0 | ||
检测器（串联三重四级杆） | ||||
离子源 | EI源 | 模式 | SRM | |
离子源温度 | 280℃ | 接口温度 | 240℃ | |
杂质 | 母离子 | 子离子 | 碰撞池能量 | |
NDMA | 74.1 | 42.1 | 15 | |
74.1 | 44.1 | 5 | ||
NDEA | 102.1 | 85.1 | 5 | |
102.1 | 56.1 | 15 | ||
6.1.2溶液配制
磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：称取磷酸氢二钾17.4g，用水溶解并稀释至1L，摇匀，即得；
空白溶液：取2.0ml二氯甲烷与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
对照品贮备液一：取NDMA约0.08g和NDEA 约0.022g，精密称定，置10ml量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取上述溶液200μl，置25ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得；（每1ml中约含NDMA64μg、NDEA17.6μg）
对照品贮备液二：精密移取对照品贮备液一1.0ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷释至刻度，摇匀，即得；（每1ml中约含NDMA 640ng、NDEA176ng）
对照品溶液：精密移取对照品贮备液二1.0ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀；取对照品溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；（每1ml中约含NDMA 6.4ng、NDEA1.76ng）
供试品溶液：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取供试品溶液2.0ml与2.0ml二氯甲烷萃取，静置分层，取下层，即得。
6.1.3计算公式
按外标法以峰面积计算供试品中各杂质的含量：
式中：
f—各杂质对照品的响应因子，ng/ml；
m1—各杂质对照品的称样量，g；
ρ—各杂质对照品的纯度，%；
m2—供试品的称样量，g；
V1—对照品溶液的稀释体积，ml；
V2—供试品溶液的稀释体积，ml；
A1—对照品溶液中各杂质的峰面积；
A2—供试品溶液中各杂质的峰面积。
6.1.4可接受标准
供试品中，含NDMA应不得过320ppb，含NDEA应不得过88ppb。
系统适用性
6.2.1溶液配制
6.1待验证的方法”项下“6.1.2溶液配制”的方法配制。
进样程序
空白溶液分析1次，对照品溶液1分析5次，对照品溶液2分析2次。
可接受标准
连续分析5次对照品溶液1，各杂质峰面积的RSD值应不得过15.0%，保留时间的RSD值应不得过1.0%；7针对照品溶液各杂质f值的RSD值应不得过15.0%。
6.2.4测试结果及结论
根据表8的测试结果可知，连续分析5次对照品溶液1，NDMA和NDEA峰面积的RSD值为4.5%和4.0%（＜15.0%），保留时间的RSD值均为0.1%（＜1.0%），7针对照品溶液NDMA和NDEA f值的RSD值为4.8%和4.1%（＜15.0%）。符合可接受标准，系统适用性符合要求。
表8-1：系统适用性试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% |
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1793 | 4.5 | 3.6467E-03 | 4.8 | 6.274 | 0.1 |
1748 | 3.7406E-03 | 6.274 | |||||||
1640 | 3.9870E-03 | 6.273 | |||||||
1836 | 3.5613E-03 | 6.274 | |||||||
1700 | 3.8462E-03 | 6.274 | |||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1767 | N.A. | 3.6271E-03 | N.A. | |||
1850 | 3.4644E-03 | ||||||||
注：N.A.为不适用，下同。
表8-2：系统适用性试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% |
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 744 | 4.0 | 2.4353E-03 | 4.1 | 7.926 | 0.1 |
701 | 2.5847E-03 | 7.926 | |||||||
747 | 2.4255E-03 | 7.921 | |||||||
783 | 2.3140E-03 | 7.921 | |||||||
740 | 2.4485E-03 | 7.926 | |||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 763 | N.A. | 2.3349E-03 | N.A. | |||
700 | 2.5450E-03 | ||||||||
专属性
6.3.1溶液配制
“6.2系统适用性”项下的“空白溶液”、“对照品溶液1”；
供试品溶液、供试品加标溶液同“6.6精密度（重复性）”项下的“供试品溶液1”和“重复性溶液1”。
进样程序
空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、供试品加标溶液各分析1次。
可接受标准
空白溶液对各杂质的测定无干扰；对照品溶液色谱图中，各杂质峰与相邻峰之间的分离度应符合要求；供试品加标溶液色谱图中，各杂质峰与相邻峰之间的分离度应符合要求，各杂质峰的保留时间应与对照品溶液色谱图中相应峰的保留时间一致。
6.3.4测试结果及结论
9的测试结果可知，空白溶液对各杂质的测定无干扰；对照品溶液色谱图中，NDMA峰与NDEA峰均无相邻峰，分离度均符合要求；供试品加标溶液色谱图中，NDMA峰与NDEA峰均无相邻峰，分离度均符合要求，NDMA和NDEA峰与对照品溶液色谱图中相应峰的保留时间一致。表明本方法专属性良好。
表9：专属性试验结果
溶液 | 保留时间min | 峰面积 | 与相邻峰间的分离度 | 色谱图编号 | |
空白溶液 | N.D. | N.D. | N.A. | ||
供试品溶液 | NDMA | N.D. | N.D. | N.A. | |
NDEA | N.D. | N.D. | N.A. | ||
对照品溶液 | NDMA | 6.274 | 1793 | 无相邻峰 | |
NDEA | 7.926 | 744 | 无相邻峰 | ||
供试品加标溶液 | NDMA | 6.274 | 1862 | 无相邻峰 | |
NDEA | 7.921 | 794 | 无相邻峰 | ||
检测限和定量限
6.4.1概述
以限度浓度的10%浓度水平作为方法的检测限，考察其信噪比是否符合要求。以限度浓度的30%浓度水平作为方法的定量限，考察其信噪比及重复性是否符合要求。
溶液配制
6.2系统适用性”项下的“对照品溶液1”；
检测限溶液（10%）：精密移取对照品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀；取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；配制1份；
30%）：精密量取对照品溶液3.0ml，置10ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；平行配制6份。
进样程序
检测限溶液分析3次、6份定量限溶液各分析1次。
可接受标准
检测限溶液中，各杂质峰的信噪比不得小于3。
各杂质峰的信噪比不得小于10；峰面积的RSD值应不得过20.0%。
6.4.5测试结果及结论
根据表10的测试结果可知，检测限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比为13.1～54.5（＞3），符合可接受标准。6份定量限溶液色谱图中，各杂质峰的信噪比为39.6～174.9（＞10），峰面积RSD值为2.0%和3.6%（＜20.0%），符合可接受标准。表明本方法NDMA、NDEA的检测限浓度分别为0.654ng/ml、0.181ng/ml，即32.7ppb、9.1ppb；NDMA、NDEA定量限浓度分别为1.962ng/ml、0.544ng/ml，即98.1ppb、27.2ppb。
表10-1：检测限和定量限试验结果（NDMA）
检测限试验结果 | ||||||
溶液 | 浓度ng/ml | 相对供试品溶液浓度ppb | 峰面积 | S/N | 色谱图编号 | |
检测限溶液 | 0.654 | 32.7 | 159 | 17.4 | ||
155 | 14.6 | |||||
162 | 13.1 | |||||
定量限试验结果 | ||||||
溶液 | 浓度ng/ml | 相对供试品溶液浓度ppb | 峰面积 | 峰面积RSD% | S/N | 色谱图编号 |
定量限溶液1 | 1.962 | 98.1 | 527 | 2.0 | 71.0 | |
定量限溶液2 | 548 | 64.7 | ||||
定量限溶液3 | 534 | 60.8 | ||||
定量限溶液4 | 550 | 39.6 | ||||
定量限溶液5 | 550 | 68.8 | ||||
定量限溶液6 | 530 | 57.5 | ||||
表10-2：检测限和定量限试验结果（NDEA）
检测限试验结果 | ||||||
溶液 | 浓度ng/ml | 相对供试品溶液浓度ppb | 峰面积 | S/N | 色谱图编号 | |
检测限溶液 | 0.181 | 9.1 | 68 | 54.5 | ||
66 | 53.9 | |||||
66 | 25.0 | |||||
定量限试验结果 | ||||||
溶液 | 浓度ng/ml | 相对供试品溶液浓度ppb | 峰面积 | 峰面积RSD% | S/N | 色谱图编号 |
定量限溶液1 | 0.544 | 27.2 | 224 | 3.6 | 158.9 | |
定量限溶液2 | 249 | 162.8 | ||||
定量限溶液3 | 241 | 174.9 | ||||
定量限溶液4 | 241 | 172.5 | ||||
定量限溶液5 | 244 | 115.4 | ||||
定量限溶液6 | 236 | 139.3 | ||||
线性及范围
概述
在限度浓度（100%）的上下取5个比较均匀的浓度点（30%、50%、100%、150%、200%）进样分析，以各杂质的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。
溶液配制
对照品溶液、对照品贮备液二同“6.2系统适用性”项下的“对照品溶液1”、“对照品贮备液二1”；
L1（30%）：精密量取对照品溶液3.0ml，置10ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
线性溶液L2（50%）：精密量取对照品贮备液二0.5ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
线性溶液L3（100%）：精密量取对照品贮备液二1.0ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
线性溶液L4（150%）：精密量取对照品贮备液二1.5ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
线性溶液L5（200%）：精密量取对照品贮备液二1.0ml，置50ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，取上述溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得。
进样程序
5个线性溶液各分析1次。
计算方式
以各个线性溶液中各杂质的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，做线性回归方程，报告线性曲线的斜率、截距和相关系数r。
可接受标准
各杂质线性回归方程的相关系数r≥0.990，Y轴截距不得大于100%浓度响应因子的0.25倍。
6.5.6测试结果及结论
根据表11的测试结果可知，NDMA线性回归方程为y = 219.6 x + 75.1，相关系数r为0.9979（＞0.990），Y轴截距与100%浓度响应因子的比值为0.06（＜0.25）。在NDMA浓度为1.962～13.077ng/ml（即98.1ppb～653.9ppb）范围内，NDMA浓度和峰面积线性关系良好；NDEA线性回归方程为y = 355.8 x + 8.2，相关系数r为0.9952（＞0.990），Y轴截距与100%浓度响应因子的比值为0.02（＜0.25）。在NDEA浓度为0.544～3.624ng/ml（即27.2ppb～181.2ppb）范围内，NDEA浓度和峰面积线性关系良好。
表11-1：线性/范围试验结果（NDMA）
浓度ng/ml | 峰面积 | 相对供试品溶液浓度ppb | 相关系数r | Y轴截距/100%浓度响应因子 | 色谱图编号 | |
30%线性溶液 | 1.962 | 556 | 98.1 | 0.9979 | 0.06 | |
50%线性溶液 | 3.269 | 731 | 163.5 | |||
100%线性溶液 | 6.539 | 1475 | 326.9 | |||
150%线性溶液 | 9.808 | 2317 | 490.4 | |||
200%线性溶液 | 13.077 | 2907 | 653.9 | |||
| ||||||
表11-2：线性/范围试验结果（NDEA）
溶液 | 浓度ng/ml | 峰面积 | 相对供试品溶液浓度ppb | 相关系数r | Y轴截距/100%浓度响应因子 | 色谱图编号 |
30%线性溶液 | 0.544 | 233 | 27.2 | 0.9952 | 0.02 | |
50%线性溶液 | 0.906 | 301 | 45.3 | |||
100%线性溶液 | 1.812 | 613 | 90.6 | |||
150%线性溶液 | 2.718 | 1037 | 135.9 | |||
200%线性溶液 | 3.624 | 1274 | 181.2 | |||
| ||||||
精密度（重复性）
6.6.1概述
由同一试验人员配制2份供试品溶液、6份供试品加标溶液（100%限度水平），进行供试品加标溶液重复性测试，计算6份供试品加标溶液中各杂质的回收率及回收率的RSD值。
溶液配制
空白溶液、对照品溶液同“6.2系统适用性”项下的“空白溶液”、“对照品溶液”；
供试品溶液同“6.1待验证的方法”项下“6.1.2溶液配制”的方法配制；
重复性溶液：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取上述溶液2.0ml与对照品溶液2.0ml萃取，静置分层，取下层，即得。平行配制6份。
6.6.3进样程序
空白溶液分析1次、对照品溶液1分析5次、对照品溶液2分析2次、2份供试品溶液各分析1次、6份重复性溶液各分析1次。
6.6.4可接受标准
6份重复性溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过15.0%。
6.6.5测试结果及结论
根据表12的测试结果可知，6份重复性溶液中，NDMA的回收率为101.0%～111.3%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为3.5%（＜15.0%）；NDEA的回收率为103.7%～112.5%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为2.7%（＜15.0%）。均符合可接受标准，表明本方法重复性良好。
表12-1：重复性（n=6）试验结果（NDMA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 平均回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||
0.10265 | 5 | 0.0205 | 0 | 0.000 | 0.000 | |||||
重复性溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1862 | 324.272 | 341.318 | 105.3 | 105.1 | 3.5 | |
0.10133 | 5 | 0.0203 | 1806 | 322.640 | 329.386 | 102.1 | ||||
0.10117 | 5 | 0.0202 | 1850 | 323.150 | 337.945 | 104.6 | ||||
0.10078 | 5 | 0.0202 | 1880 | 324.401 | 344.754 | 106.3 | ||||
0.10158 | 5 | 0.0203 | 1786 | 321.846 | 324.937 | 101.0 | ||||
0.10094 | 5 | 0.0202 | 1969 | 323.886 | 360.503 | 111.3 | ||||
表12-2：重复性（n=6）试验结果（NDEA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 平均回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||
0.10265 | 5 | 0.0205 | 0 | 0.000 | 0.000 | |||||
重复性溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 794 | 89.856 | 96.124 | 107.0 | 107.5 | 2.7 | |
0.10133 | 5 | 0.0203 | 770 | 89.404 | 92.749 | 103.7 | ||||
0.10117 | 5 | 0.0202 | 800 | 89.545 | 96.515 | 107.8 | ||||
0.10078 | 5 | 0.0202 | 835 | 89.892 | 101.128 | 112.5 | ||||
0.10158 | 5 | 0.0203 | 801 | 89.184 | 96.246 | 107.9 | ||||
0.10094 | 5 | 0.0202 | 789 | 89.749 | 95.405 | 106.3 | ||||
6.7 精密度（中间精密度）
6.7.1概述
由不同的试验人员，于不同日期，配制6份供试品加标溶液（100%限度水平），进行供试品加标溶液中间精密度测试。
溶液配制
空白溶液、对照品贮备液一、对照品贮备液二、对照品溶液、供试品溶液等同“6.1待验证的方法”项下“6.1.2溶液配制”的方法配制；
中间精密度溶液同“6.6精密度（重复性）”项下“重复性溶液”的方法配制，平行配制6份。
6.7.3进样程序
空白溶液分析1次、对照品溶液1分析5次、对照品溶液2分析2次、2份供试品溶液各分析1次、6份中间精密度溶液各分析1次。
6.7.4可接受标准
6份中间精密度溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过15.0%。与重复性6次结果，共12次供试品加标溶液中，各杂质回收率的RSD值应不得过20.0%。
测试结果及结论
根据表13的测试结果可知，空白溶液对各杂质的测定无干扰；连续分析5次对照品溶液1，NDMA和NDEA峰面积的RSD值为3.0%和3.7%（＜15.0%），保留时间的RSD值均为0.1%（＜1.0%），7针对照品溶液NDMA和NDEA f值的RSD值为2.6%和4.1%（＜15.0%），系统适用性符合要求。根据表14的测试结果可知，6份中间精密度溶液中，NDMA的回收率为95.5%～104.1%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为3.5%（＜15.0%）；NDEA的回收率为93.2%～106.1%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为4.5%（＜15.0%）。根据表15的测试结果可知，两名试验人员所得12份供试品加标溶液中NDMA和NDEA回收率的RSD值为4.4%和4.9%（＜20.0%）。表明本方法精密度良好。
表13-1：中间精密度-系统适用性试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% |
NDMA对照品1 | 0.08200 | 12500000 | 6.555 | 1740 | 3.0 | 3.7675E-03 | 2.6 | 6.268 | 0.1 |
1613 | 4.0641E-03 | 6.268 | |||||||
1722 | 3.8069E-03 | 6.268 | |||||||
1677 | 3.9090E-03 | 6.268 | |||||||
1713 | 3.8269E-03 | 6.269 | |||||||
NDMA对照品2 | 0.08176 | 6.536 | 1680 | N.A. | 3.8906E-03 | N.A. | |||
1655 | 3.9494E-03 | ||||||||
色谱图编号 | |||||||||
表13-2：中间精密度-系统适用性试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% |
NDEA对照品1 | 0.02245 | 12500000 | 1.793 | 771 | 3.7 | 2.3262E-03 | 4.1 | 7.921 | 0.1 |
704 | 2.5476E-03 | 7.921 | |||||||
764 | 2.3475E-03 | 7.921 | |||||||
759 | 2.3630E-03 | 7.916 | |||||||
734 | 2.4434E-03 | 7.921 | |||||||
NDEA对照品2 | 0.02235 | 1.785 | 724 | N.A. | 2.4662E-03 | N.A. | |||
788 | 2.2659E-03 | ||||||||
色谱图编号 | |||||||||
表14-1：中间精密度（n=6）试验结果（NDMA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 平均回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10058 | 5 | 0.0201 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||
0.10156 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.000 | 0.000 | |||||
中间精密度溶液 | 0.10290 | 5 | 0.0206 | 1644 | 318.533 | 310.567 | 97.5 | 99.6 | 3.5 | |
0.10193 | 5 | 0.0204 | 1733 | 321.564 | 330.496 | 102.8 | ||||
0.10016 | 5 | 0.0200 | 1755 | 327.247 | 340.606 | 104.1 | ||||
0.10145 | 5 | 0.0203 | 1637 | 323.086 | 313.665 | 97.1 | ||||
0.10133 | 5 | 0.0203 | 1611 | 323.468 | 309.048 | 95.5 | ||||
0.10039 | 5 | 0.0201 | 1694 | 326.497 | 328.014 | 100.5 | ||||
表14-2：中间精密度（n=6）试验结果（NDEA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 平均回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10058 | 5 | 0.0201 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||
0.10156 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.000 | 0.000 | |||||
中间精密度溶液 | 0.10290 | 5 | 0.0206 | 698 | 87.147 | 81.204 | 93.2 | 100.8 | 4.5 | |
0.10193 | 5 | 0.0204 | 772 | 87.976 | 90.668 | 103.1 | ||||
0.10016 | 5 | 0.0200 | 795 | 89.531 | 95.019 | 106.1 | ||||
0.10145 | 5 | 0.0203 | 773 | 88.393 | 91.215 | 103.2 | ||||
0.10133 | 5 | 0.0203 | 747 | 88.497 | 88.251 | 99.7 | ||||
0.10039 | 5 | 0.0201 | 745 | 89.326 | 88.839 | 99.5 | ||||
表15-1：中间精密度（n=12）试验结果（NDMA）
溶液 | 回收率% | 回收率RSD%（n=6） | 回收率RSD%（n=12） |
重复性 | 105.3 | 3.5 | 4.4 |
102.1 | |||
104.6 | |||
106.3 | |||
101.0 | |||
111.3 | |||
中间精密度 | 97.5 | 3.5 | |
102.8 | |||
104.1 | |||
97.1 | |||
95.5 | |||
100.5 |
表15-2：中间精密度（n=12）试验结果（NDEA）
溶液 | 回收率% | 回收率RSD%（n=6） | 回收率RSD%（n=12） |
重复性 | 107.0 | 2.7 | 4.9 |
103.7 | |||
107.8 | |||
112.5 | |||
107.9 | |||
106.3 | |||
中间精密度 | 93.2 | 4.5 | |
103.1 | |||
106.1 | |||
103.2 | |||
99.7 | |||
99.5 |
准确度
6.8.1概述
准确度是通过回收率来反映。通过在供试品溶液中加入30%、100%、150%三个不同限度浓度的对照品溶液，每个浓度平行制备3份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9份回收率数据的相对标准偏差（RSD）。
溶液配制
空白溶液、对照品溶液、供试品溶液等同“6.6精密度（重复性）”项下的相应溶液；
线性溶液L1（30%）、线性溶液L4（150%）同“6.5线性及范围”项下的相应溶液；
1（30%）：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取上述溶液2.0ml与2.0ml线性溶液L1（30%）萃取，静置分层，取下层，即得。平行配制3份；
2（100%）：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取上述溶液2.0ml与对照品溶液2.0ml萃取，静置分层，取下层，即得。平行配制3份；
3（150%）：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取上述溶液2.0ml与2.0ml线性溶液L4（150%）萃取，静置分层，取下层，即得。平行配制3份。
进样程序
空白溶液分析1次、对照品溶液1分析5次、对照品溶液2分析2次、2份供试品溶液各分析1次、9份准确度溶液各分析1次。
计算公式
式中：
f—各杂质对照品的响应因子，ng/ml；
C1—各杂质对照品溶液的配制浓度，ng/ml；
C2—各准确度溶液中供试品的浓度，g/ml；
C3—供试品溶液中供试品的浓度，g/ml；
A1—各准确度溶液中各杂质的峰面积；
A2—供试品溶液中各杂质的峰面积。
可接受标准
9份准确度溶液中，各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过20.0%。
6.8.6测试结果及结论
16的测试结果可知，9份准确度溶液中，NDMA的回收率为81.5%～105.3%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为10.9%（＜20.0%）；NDEA的回收率为84.3%～116.8%（在70%～125%之间），回收率的RSD值为11.4%（＜20.0%）。均符合可接受标准。表明本方法准确度良好。
表16-1：准确度试验结果（NDMA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | ||
0.10265 | 5 | 0.0205 | 0 | 0.000 | 0.000 | ||||
30%准确度溶液 | 0.10102 | 5 | 0.0202 | 554 | 97.089 | 101.351 | 104.4 | 10.9 | |
0.10205 | 5 | 0.0204 | 518 | 96.109 | 93.809 | 97.6 | |||
0.10170 | 5 | 0.0203 | 531 | 96.440 | 96.494 | 100.1 | |||
100%准确度溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1862 | 324.272 | 341.318 | 105.3 | ||
0.10133 | 5 | 0.0203 | 1806 | 322.640 | 329.386 | 102.1 | |||
0.10117 | 5 | 0.0202 | 1850 | 323.150 | 337.945 | 104.6 | |||
150%准确度溶液 | 0.10068 | 5 | 0.0201 | 2172 | 487.084 | 398.697 | 81.9 | ||
0.10096 | 5 | 0.0202 | 2199 | 485.733 | 402.533 | 82.9 | |||
0.10162 | 5 | 0.0203 | 2163 | 482.579 | 393.372 | 81.5 | |||
表16-2：准确度试验结果（NDEA）
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | 回收率RSD% | 色谱图编号 |
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | ||
0.10265 | 5 | 0.0205 | 0 | 0.000 | 0.000 | ||||
30%准确度溶液 | 0.10102 | 5 | 0.0202 | 260 | 26.903 | 31.414 | 116.8 | 11.4 | |
0.10205 | 5 | 0.0204 | 230 | 26.632 | 27.509 | 103.3 | |||
0.10170 | 5 | 0.0203 | 253 | 26.724 | 30.364 | 113.6 | |||
100%准确度溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 794 | 89.856 | 96.124 | 107.0 | ||
0.10133 | 5 | 0.0203 | 770 | 89.404 | 92.749 | 103.7 | |||
0.10117 | 5 | 0.0202 | 800 | 89.545 | 96.515 | 107.8 | |||
150%准确度溶液 | 0.10068 | 5 | 0.0201 | 1004 | 134.972 | 121.716 | 90.2 | ||
0.10096 | 5 | 0.0202 | 980 | 134.597 | 118.477 | 88.0 | |||
0.10162 | 5 | 0.0203 | 939 | 133.723 | 112.783 | 84.3 | |||
溶液稳定性
概述
取对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液，室温放置，分别于不同时间点取样检测，考察对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液在室温条件下的稳定性。
溶液配制
同“6.6精密度（重复性）”项下的“对照品溶液1”、“供试品溶液1”、“重复性溶液1”。
6.9.3进样程序
在不同时间点取对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液各分析1次。
可接受标准
对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液，各时间点检测结果与0小时比较各杂质峰面积的比值为70%～125%。（备注：供试品溶液中检测得到的各杂质峰面积如均低于检测限的峰面积，可直接判定为溶液稳定）
5测试结果及结论
根据表17～表19的测试结果可知，对照品溶液在室温放置102.1小时内，各时间点下NDMA峰面积的比值为93.1%～106.8%，NDEA峰面积的比值为99.5%～115.2%（均在70%～125%之间）；供试品溶液在室温放置99.5小时内，各时间点下NDMA、NDEA峰面积均为0；供试品加标溶液在室温放置99.2小时内，各时间点下NDMA峰面积的比值为92.2%～105.7%，NDEA峰面积的比值为100.1%～106.2%（均在70%～125%之间）。表明对照品溶液在室温放置102.1小时内稳定；供试品溶液在室温放置99.5小时内稳定，不会降解产生NDMA和NDEA；供试品加标溶液在室温放99.2小时内稳定。
表17：对照品溶液稳定性试验结果
时间点h | 进样时间 | NDMA | NDEA | 色谱图编号 | ||
峰面积 | 比值% | 峰面积 | 比值% | |||
0 | 1793 | N.A. | 744 | N.A. | ||
1.1 | 1700 | 94.8 | 740 | 99.5 | ||
7.5 | 1805 | 100.7 | 756 | 101.6 | ||
10.9 | 1839 | 102.6 | 762 | 102.4 | ||
21.6 | 1737 | 96.9 | 850 | 114.2 | ||
88.9 | 1915 | 106.8 | 857 | 115.2 | ||
95.5 | 1774 | 98.9 | 829 | 111.4 | ||
102.1 | 1670 | 93.1 | 799 | 107.4 | ||
色谱图编号 | ||||||
表18：供试品溶液稳定性试验结果
时间点h | 进样时间 | NDMA | NDEA | 色谱图编号 | ||
峰面积 | 比值% | 峰面积 | 比值% | |||
0 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
6.0 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
9.5 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
19.0 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
86.3 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
92.9 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
99.5 | 0 | N.A. | 0 | N.A. | ||
色谱图编号 | ||||||
表19：供试品加标溶液稳定性试验结果
时间点h | 进样时间 | NDMA | NDEA | 色谱图编号 | ||
峰面积 | 比值% | 峰面积 | 比值% | |||
0 | 2023/5/18 19:13:54 | 1862 | N.A. | 794 | N.A. | |
5.1 | 2023/5/19 0:25:44 | 1804 | 96.9 | 826 | 104.0 | |
8.6 | 2023/5/19 3:53:41 | 1934 | 103.9 | 843 | 106.2 | |
18.7 | 2023/5/19 13:57:54 | 1717 | 92.2 | 799 | 100.6 | |
86.0 | 2023/5/22 9:18:10 | 1969 | 105.7 | 810 | 102.0 | |
92.6 | 2023/5/22 15:53:34 | 1862 | 100.0 | 795 | 100.1 | |
99.2 | 2023/5/22 22:29:57 | 1770 | 95.1 | 812 | 102.3 | |
色谱图编号 | ||||||
耐用性
概述
考察在色谱条件有微小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据，对对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液进行分析，考察系统适用性和回收率是否符合要求，各耐用性色谱条件见下表20。
20：耐用性色谱条件
ml/min） | 分流比 | ℃） | |
1.200 | 5:1 | 230 | |
±0.05 | 5:1 | 230 | |
分流比 | 1.200 | 4:1/6:1 | 230 |
1.200 | 5:1 | ±5 |
6.10.2溶液配制
空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液同“6.6精密度（重复性）”项下的“空白溶液”、“对照品溶液”、“供试品溶液1”、“重复性溶液1”。
6.10.3进样程序
各耐用性实验条件下，空白溶液分析1次、对照品溶液1分析5次、对照品溶液2分析2次、供试品溶液分析1次、供试品加标溶液分析1次。
可接受标准
在各种不同的耐用性实验条件下，系统适用性应符合要求；各杂质的回收率应在70%～125%之间，回收率的RSD值应不得过20.0%。
6.10.5测试结果及结论
根据表21～表27的测试结果可知，本方法的色谱条件：柱流速（1.200±0.05ml/min）、分流比（4:1/6:1）、进样口温度（230±5℃），在微小变动的情况下，5针对照品溶液1色谱图中，各杂质峰面积RSD值为0.9%～7.0%（＜15.0%），保留时间的RSD值为0.0%～0.1%（＜1.0%），7针对照品溶液各杂质f值的RSD值为1.1%～7.2%（＜15.0%），各条件下系统适用性均符合要求。NDMA的回收率为90.9%～105.1%（在70%～125%之间），各条件下回收率的RSD值为4.9%（＜20.0%）；NDEA的回收率为94.2%～107.5%（在70%～125%之间），各条件下回收率的RSD值为4.6%（＜20.0%）。均符合可接受标准，表明本方法的耐用性良好。
表21-1：耐用性-柱流速1.15ml/min试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1775 | 3.2 | 3.6837E-03 | 3.2 | 6.323 | 0.1 | |||||
1721 | 3.7993E-03 | 6.324 | ||||||||||||
1730 | 3.7795E-03 | 6.324 | ||||||||||||
1652 | 3.9580E-03 | 6.323 | ||||||||||||
1650 | 3.9628E-03 | 6.319 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1733 | N.A. | 3.6983E-03 | N.A. | ||||||||
1634 | 3.9223E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1657 | 324.272 | 314.664 | 97.0 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表21-2：耐用性-柱流速1.15ml/min试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 830 | 7.0 | 2.1830E-03 | 7.2 | 7.976 | 0.1 | |||||
846 | 2.1417E-03 | 7.976 | ||||||||||||
770 | 2.3531E-03 | 7.976 | ||||||||||||
773 | 2.3439E-03 | 7.976 | ||||||||||||
709 | 2.5555E-03 | 7.976 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 861 | N.A. | 2.0691E-03 | N.A. | ||||||||
784 | 2.2723E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 779 | 89.856 | 87.855 | 97.8 | |||||||
色谱图编号 | 2300051，No.055-064 | |||||||||||||
表22-1：耐用性-柱流速1.25ml/min试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1855 | 3.4 | 3.5249E-03 | 3.4 | 6.224 | 0.1 | |||||
1764 | 3.7067E-03 | 6.224 | ||||||||||||
1883 | 3.4724E-03 | 6.224 | ||||||||||||
1741 | 3.7557E-03 | 6.224 | ||||||||||||
1786 | 3.6610E-03 | 6.229 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1714 | N.A. | 3.7393E-03 | N.A. | ||||||||
1830 | 3.5022E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1640 | 324.272 | 294.684 | 90.9 | |||||||
色谱图编号 | 2300051，No.065-074 | |||||||||||||
表22-2：耐用性-柱流速1.25ml/min试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 839 | 5.3 | 2.1595E-03 | 4.3 | 7.871 | 0.1 | |||||
831 | 2.1803E-03 | 7.876 | ||||||||||||
779 | 2.3259E-03 | 7.871 | ||||||||||||
748 | 2.4223E-03 | 7.871 | ||||||||||||
761 | 2.3809E-03 | 7.876 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 784 | N.A. | 2.2723E-03 | N.A. | ||||||||
780 | 2.2840E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 766 | 89.856 | 86.968 | 96.8 | |||||||
色谱图编号 | 2300051，No.065-074 | |||||||||||||
表23-1：耐用性-分流比4:1试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1868 | 1.8 | 3.5003E-03 | 2.8 | 6.278 | 0.1 | |||||
1882 | 3.4743E-03 | 6.278 | ||||||||||||
1801 | 3.6305E-03 | 6.278 | ||||||||||||
1867 | 3.5022E-03 | 6.278 | ||||||||||||
1863 | 3.5097E-03 | 6.279 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1809 | N.A. | 3.5429E-03 | N.A. | ||||||||
1936 | 3.3105E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1908 | 324.272 | 330.786 | 102.0 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表23-2：耐用性-分流比4:1试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 827 | 3.4 | 2.1909E-03 | 2.9 | 7.926 | 0.0 | |||||
818 | 2.2150E-03 | 7.926 | ||||||||||||
867 | 2.0898E-03 | 7.926 | ||||||||||||
870 | 2.0826E-03 | 7.926 | ||||||||||||
882 | 2.0543E-03 | 7.926 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 832 | N.A. | 2.1412E-03 | N.A. | ||||||||
850 | 2.0959E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 820 | 89.856 | 86.385 | 96.1 | |||||||
色谱图编号 | 2300051，No.075-084 | |||||||||||||
表24-1：耐用性-分流比6:1试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1343 | 3.8 | 4.8687E-03 | 3.3 | 6.269 | 0.1 | |||||
1437 | 4.5502E-03 | 6.269 | ||||||||||||
1472 | 4.4420E-03 | 6.269 | ||||||||||||
1394 | 4.6905E-03 | 6.268 | ||||||||||||
1461 | 4.4754E-03 | 6.269 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1417 | N.A. | 4.5230E-03 | N.A. | ||||||||
1405 | 4.5616E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1393 | 324.272 | 316.911 | 97.7 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表24-2：耐用性-分流比6:1试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 644 | 0.9 | 2.8134E-03 | 1.1 | 7.921 | 0.1 | |||||
648 | 2.7961E-03 | 7.921 | ||||||||||||
636 | 2.8488E-03 | 7.926 | ||||||||||||
644 | 2.8134E-03 | 7.921 | ||||||||||||
636 | 2.8488E-03 | 7.921 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 619 | N.A. | 2.8780E-03 | N.A. | ||||||||
625 | 2.8504E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 613 | 89.856 | 86.204 | 95.9 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表25-1：耐用性-进样口温度225℃试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1755 | 2.3 | 3.7257E-03 | 1.9 | 6.273 | 0.1 | |||||
1701 | 3.8440E-03 | 6.273 | ||||||||||||
1723 | 3.7949E-03 | 6.274 | ||||||||||||
1736 | 3.7665E-03 | 6.273 | ||||||||||||
1656 | 3.9484E-03 | 6.269 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1696 | N.A. | 3.7790E-03 | N.A. | ||||||||
1689 | 3.7946E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1686 | 324.272 | 318.369 | 98.2 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表25-2：耐用性-进样口温度225℃试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 765 | 4.1 | 2.3684E-03 | 3.7 | 7.921 | 0.1 | |||||
756 | 2.3966E-03 | 7.921 | ||||||||||||
761 | 2.3809E-03 | 7.921 | ||||||||||||
822 | 2.2042E-03 | 7.921 | ||||||||||||
742 | 2.4419E-03 | 7.921 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 736 | N.A. | 2.4205E-03 | N.A. | ||||||||
720 | 2.4743E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 768 | 89.856 | 90.795 | 101.0 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表26-1：耐用性-进样口温度235℃试验结果（NDMA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDMA对照品1 | 0.08179 | 12500000 | 6.539 | 1637 | 3.2 | 3.9943E-03 | 3.0 | 6.274 | 0.1 | |||||
1720 | 3.8015E-03 | 6.269 | ||||||||||||
1738 | 3.7622E-03 | 6.273 | ||||||||||||
1612 | 4.0562E-03 | 6.268 | ||||||||||||
1686 | 3.8782E-03 | 6.273 | ||||||||||||
NDMA对照品2 | 0.08017 | 6.409 | 1620 | N.A. | 3.9562E-03 | N.A. | ||||||||
1590 | 4.0309E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 1561 | 324.272 | 303.904 | 93.7 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表26-2：耐用性-进样口温度235℃试验结果（NDEA）
对照品溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度ng/ml | 峰面积 | 峰面积RSD% | f值 | f 值RSD% | 保留时间min | 保留时间RSD% | |||||
NDEA对照品1 | 0.02268 | 12500000 | 1.812 | 777 | 4.5 | 2.3319E-03 | 4.0 | 7.926 | 0.1 | |||||
769 | 2.3561E-03 | 7.921 | ||||||||||||
775 | 2.3379E-03 | 7.926 | ||||||||||||
697 | 2.5995E-03 | 7.921 | ||||||||||||
752 | 2.4094E-03 | 7.926 | ||||||||||||
NDEA对照品2 | 0.02230 | 1.782 | 740 | N.A. | 2.4074E-03 | N.A. | ||||||||
718 | 2.4812E-03 | |||||||||||||
回收率结果 | ||||||||||||||
溶液 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 峰面积 | 理论加入量ppb | 实际测定量ppb | 回收率% | |||||||
供试品溶液 | 0.10185 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.000 | 0.000 | N.A. | |||||||
供试品加标溶液 | 0.10082 | 5 | 0.0202 | 706 | 89.856 | 84.648 | 94.2 | |||||||
色谱图编号 | ||||||||||||||
表27：耐用性试验结果汇总
改变条件 | 各杂质回收率（%） | 回收率RSD（%） | ||
NDMA | NDEA | NDMA | NDEA | |
标准条件 | 105.1 | 107.5 | 4.9 | 4.6 |
改变柱流速1.15ml/min | 97.0 | 97.8 | ||
改变柱流速1.25ml/min | 90.9 | 96.8 | ||
改变分流比4:1 | 102.0 | 96.1 | ||
改变分流比6:1 | 97.7 | 95.9 | ||
改变进样口温度225℃ | 98.2 | 101.0 | ||
改变进样口温度235℃ | 93.7 | 94.2 | ||
注：标准条件的回收率取“6.6精密度（重复性）”项下的平均回收率。
溶液配制
、供试品溶液等同“6.1待验证的方法”项下“6.1.2溶液配制”的方法配制；每批供试品平行配制2份溶液。
进样分析
表28：进样分析
进样次数 | 系统适用性要求 | |
空白溶液 | 1针 | 空白溶液对各杂质的测定无干扰 |
对照品溶液1 | 5针 | 各杂质峰面积的RSD≤15.0%，保留时间的RSD≤1.0% |
对照品溶液2 | 2针 | 7针对照品溶液中各杂质f值的RSD≤15.0% |
供试品溶液1 | 1针 | N.A. |
供试品溶液2 | 1针 | N.A. |
可接受标准
NDMA应不得过320ppb，含NDEA应不得过88ppb。
测定结果及结论
根据表29的测试结果可知，6批头孢地尼（批号：B2212107、B2212105、B2302103、AP006-2206-001、AP006-2211-064、AP006-2303-016）中，NDMA和NDEA均为未检出。
表29：头孢地尼中各杂质含量测定结果
样品批号 | 称样量g | 稀释体积ml | 浓度g/ml | 杂质 | 峰面积 | 含量ppb | 含量平均值ppb |
B2212107 | 0.10058 | 5 | 0.0201 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10156 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
0.10058 | 5 | 0.0201 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10156 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
B2212105 | 0.10197 | 5 | 0.0204 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10053 | 5 | 0.0201 | 0 | 0.00 | |||
0.10197 | 5 | 0.0204 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10053 | 5 | 0.0201 | 0 | 0.00 | |||
B2302103 | 0.10027 | 5 | 0.0201 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10143 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
0.10027 | 5 | 0.0201 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10143 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
AP006-2206-001 | 0.10044 | 5 | 0.0201 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10181 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.00 | |||
0.10044 | 5 | 0.0201 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10181 | 5 | 0.0204 | 0 | 0.00 | |||
AP006-2211-064 | 0.10076 | 5 | 0.0202 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10163 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
0.10076 | 5 | 0.0202 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10163 | 5 | 0.0203 | 0 | 0.00 | |||
AP006-2303-016 | 0.10091 | 5 | 0.0202 | NDMA | 0 | 0.00 | 0.0 |
0.10113 | 5 | 0.0202 | 0 | 0.00 | |||
0.10091 | 5 | 0.0202 | NDEA | 0 | 0.00 | 0.0 | |
0.10113 | 5 | 0.0202 | 0 | 0.00 | |||
色谱图编号 | 2300051，No.115-122、131-142 | ||||||
按照“六、方法学验证”结果显示，本方法适用于头孢地尼中NDMA和NDEA的含量进行测定，最终确定头孢地尼中NDMA和NDEA含量的测定方法如下：
色谱条件
表30：色谱条件
色谱柱 | VF-624MS（30m×0.25mm，1.40μm） | 柱流速 | 1.200ml/min | |
进样口 | ||||
温度 | 230℃ | 分流比 | 5:1 | |
载气 | 氦气 | 进样量 | 2μl | |
升温程序 | ||||
升温速率（℃/min） | 温度（℃） | 保持时间（min） | ||
N.A | 50 | 2 | ||
20 | 230 | 0 | ||
检测器（串联三重四级杆） | ||||
离子源 | EI源 | 模式 | SRM | |
离子源温度 | 280℃ | 接口温度 | 240℃ | |
杂质 | 母离子 | 子离子 | 碰撞池能量 | |
NDMA | 74.1 | 42.1 | 15 | |
74.1 | 44.1 | 5 | ||
NDEA | 102.1 | 85.1 | 5 | |
102.1 | 56.1 | 15 | ||
测定法
磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：称取磷酸氢二钾17.4g，用水溶解并稀释至1L，摇匀，即得；
空白溶液：取2.0ml二氯甲烷与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；
对照品贮备液一：取NDMA约0.08g和NDEA 约0.022g，精密称定，置10ml量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取上述溶液200μl，置25ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得；（每1ml中约含NDMA64μg、NDEA17.6μg）
对照品贮备液二：精密移取对照品贮备液一1.0ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷释至刻度，摇匀，即得；（每1ml中约含NDMA 640ng、NDEA 176ng）
对照品溶液：精密移取对照品贮备液二1.0ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀；取对照品溶液2.0ml与2.0ml磷酸氢二钾溶液萃取，静置分层，取下层，即得；（每1ml中约含NDMA 6.4ng、NDEA 1.76ng）
供试品溶液：取供试品约0.1g，精密称定，置5ml量瓶中，加磷酸氢二钾溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；取供试品溶液2.0ml与2.0ml二氯甲烷萃取，静置分层，取下层，即得。
进样程序及系统适用性要求
表31：进样程序及系统适用性要求
名称 | 进样次数 | 系统适用性要求 |
空白溶液 | 1针 | 空白溶液对各杂质的测定无干扰 |
对照品溶液1 | 5针 | 各杂质峰面积的RSD≤15.0%，保留时间的RSD≤1.0% |
对照品溶液2 | 2针 | 7针对照品溶液中各杂质f值的RSD≤15.0% |
供试品溶液1 | 1针 | N.A. |
供试品溶液2 | 1针 | N.A. |
计算公式
按外标法以峰面积计算供试品中各杂质的含量：
式中：
f—各杂质对照品的响应因子，ng/ml；
m1—各杂质对照品的称样量，g；
ρ—各杂质对照品的纯度，%；
m2—供试品的称样量，g；
V1—对照品溶液的稀释体积，ml；
V2—供试品溶液的稀释体积，ml；
A1—对照品溶液中各杂质的峰面积；
A2—供试品溶液中各杂质的峰面积。
可接受标准
供试品中，含NDMA应不得过320ppb，含NDEA应不得过88ppb。
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本文最后更新于2025-03-23 09:30:23，如果你的问题还没有解决，可以加入交流群和群友们一起讨论。
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