供叶酸杂质H反应液制备纯化技术

试剂材料

试剂：乙腈（分析纯过膜）、甲酸（分析纯）、水为去离子水

色谱柱：Dubhe  C18  10μm，100×650mm

样品前处理：反应液用纯水稀释5倍 ，滴加氨水至溶液呈透明，过0.22 μm滤膜后上样。

制备液相：DAC100制备液相

色谱条件

 一次制备

流动相：A：0.1%甲酸水B：回收乙腈；

检测器：210nm；进样量：12mL；流速：250mL/min

洗脱梯度：

二次制备、

除盐或浓缩

流动相：A：0.1%甲酸水B：回收乙腈；

检测器：254 nm；流速：250mL/min 进样：将制备液加水稀释三倍，每三批浓缩一次

洗脱梯度：

制备纯化图谱

注意：收集30.2-32.0min时间段。

浓缩制备谱图

注意：收集9.5~10.0min时间段

注意事项：叶酸杂质制备时，检测器响应值较高，而反应液浓度不能太高，浓度太高出峰容易变形。本次制备实际进料的原料经稀释后浓度在2mg/ml左右。也就是用100mm大机制备，单次制备收率只能得到几个毫克。